općenitost
Imunofiksacija je laboratorijski test koji omogućuje identifikaciju i tipizaciju gama globulina prisutnih u biološkom uzorku.
Detaljno, analiza omogućuje proučavanje - u krvi ili urinu pacijenta - klase imunoglobulina (IgA, IgG, IgM, IgE ili IgD) i tip kapa ili lambda lakog lanca, prema njihovoj specifičnoj elektroforetskoj pokretljivosti., Nakon toga, za identifikaciju koji je gama globulin uključen, imunofiksacija uključuje inokulaciju specifičnih antigena za fragment ili odgovarajuće protutijelo ( anti-imunoglobulin antiserum ): prisutnost sumnjive promjene potvrđena je formacijom taloga, vidljivog golim okom ili mikroskopom.
Ova informacija je od velike važnosti za utvrđivanje, osobito, dijagnoze patologija plazma stanica (gamopatije ili discrazije plazma stanica). Imunofiksacija je vrlo korisna za procjenu i praćenje multiplog mijeloma, Waldenströmove makroglobulinemije i primarne amiloidoze (također poznate kao amiloidoza lakog lanca).
što
Imunofiksacija (ili imunoelektroforeza, također skraćena u kratici IFE ) je tehnika koja može odrediti da li je i koja klasa imunoglobulina (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) ili tip kapa ili lambda lakog lanca prisutna u višak ili defekt u krvnom serumu i urinu pacijenta.
Kappa i lambda laki lanci karakteriziraju monoklonsku komponentu, tj. Antitijela s istom identičnom kemijskom strukturom.
Serum i imunofiksacija mokraće: kada je naznačeno?
Plazmacelularne displazije ili gamopatije heterogena su skupina poremećaja nepoznate etiologije koje karakteriziraju:
- Neproporcionalna proliferacija klona B stanica ;
- Prisutnost u serumu i / ili urinu tipa imunoglobulina (ili njegove polipeptidne podjedinice), strukturno i elektroforetski homogena ( monoklonska ).
U pravilu se dijagnosticiraju plazma stanice pomoću elektroforeze serumskih i urinarnih proteina, nakon čega slijedi imunofiksacija seruma (IFE).
Istodobno se može propisati krvna pretraga za mjerenje ukupne koncentracije imunoglobulina (IgG + IgM + IgA).
Da biste saznali više: Imunoglobulini - što su oni, kako se mjere i referentne vrijednosti »Imunofiksacija: osnovni princip
Imunofiksacija je ispitivanje koje uključuje dvije faze (prvo elektroforezu u agaroznom gelu, zatim imunoprecipitaciju sa specifičnim antiserumima ).
Prvi korak imunofiksacije je isti kao i kod ELEKTROFOREZE proteina (ili protidograma), stoga je potrebno zapamtiti neki koncept:
- Elektroforeza je laboratorijska analiza koja omogućuje određivanje količine proteina prisutnih u krvnom serumu ili drugim biološkim uzorcima i, za svaku frakciju, otkriva postoje li kakve anomalije u smislu kvalitete. Konkretno, ovaj ispit omogućuje razdvajanje proteina na pet skupina: albumin, alfa 1 globulin, alfa 2 globulin, beta globulin i gama globulin ; potonji su specifičnije ispitani s imunofiksacijom.
- Elektroforeza je separacijska metoda koja se temelji na različitoj brzini migracije električki nabijenih čestica, kroz otopinu i inertni nosač, pod utjecajem električnog polja koje generira istosmjerna struja. U praksi, ispit koristi električni naboj i molekularnu masu proteina prisutnih u uzorku pacijenta. Pod impulsom električnog polja, te makromolekule migriraju i "grupiraju" se prema tipu, reagirajući na stres na karakterističan način. Rezultat ( elektroforetsko praćenje ) sastoji se od različitih vrhova i krivulja kojima odgovaraju frakcije proteina. Normalno, prvi vrh, veći i uži, je albumin ; slijediti, vidjeti vrhove globulina, znatno niži od albumina. Povećanje ili smanjenje amplitude i intenziteta pikova koji se formiraju na putu ukazuju na veću ili manju prisutnost proteina u svakoj kategoriji; što je više proteina prisutno u pojasu, to je viši odgovarajući vrh. U slučaju gama globulina, ako se želi znati količina svake od različitih klasa (IgA, IgM, IgG itd.), Bit će potrebno pribjeći pojedinačnoj dozi. Općenito, što je više gama globulina prisutno u pojasu, veći je odgovarajući pik; visina odgovara ukupnoj količini proteina koji pripadaju određenoj kategoriji.
IMUNOFISSATION pruža:
1) Elektroforeza s Agaroznim gelom : uzorak pacijenta (serum ili urin) se taloži na elektroforetskoj vrpci, tj. Na podlogu za migraciju (obično agarozni gel). Primjenom električnog polja, generiranog istosmjernom strujom, dobiva se razdvajanje u različitim trakama. U praksi, svaki tip gama globulina prisutan u smjesi (tj. U uzorku pacijenta) migrira na temelju molekulske mase i električnog naboja. Različita elektroforetska pokretljivost gama globulina omogućuje njihovu identifikaciju (svaka od njih se podudara s određenim pojasom u elektroforetskom putu) i promatra sve anomalije.
2) Imunoprecipitacija sa specifičnim antiserumom (fiksacija) : specifični antigeni za specifično antitijelo ili fragment dodaju se pojedinačno u svaku elektroforetsku traku (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-light kappa ili anti-lanac) lambda laki lanac). Ako je prisutan monoklonski protein, interakcija antigena s odgovarajućim antitijelima će proizvesti uski pojas (to znači da je rezultat pozitivan) i stvaranje precipitata, vidljivog golim okom ili mikroskopom. Konačno, uzorak je obrađen (tj. Opran i obojen) da bi se uklonili proteini koji se nisu istaložili, kako bi se postiglo sušenje gela i nastavilo čitanje rezultata.
Zašto radi
Za što je imunofiksacija?
Imunofiksacija seruma je ispit za dijagnosticiranje ili praćenje bolesti karakteriziranih promjenom gama globulina, posebno kada se radi o proizvodnji monoklonske komponente ( monoklonska gamopatija ).
Da biste saznali više: Monoklonalne gamopatije - što i koje »Imunofiksacija je korisna u slučajevima sumnje na diskraziju plazma stanica i temeljna je za proučavanje MIELOMA (i srodnih patologija) i MGUS (akronim za "monoklonalne gamopatije nesigurnog značenja").
Ovaj test nam također omogućuje da ocijenimo Waldenströmovu makroglobulinemiju i amiloidozu lakog lanca ( AL ).
Imunofiksacija: kada se propisuje pregled?
Indikacija za imunofiksaciju slijedi klinički ili laboratorijski dokaz koji podiže sumnju na promjene monoklonskih antitijela ili imunoglobulina u serumu ili urinu.
Primjerice, ovaj ispit omogućuje produbljivanje rezultata seroprotektivne ili urinarne elektroforeze: kada se u elektroforetskom praćenju bendovi koji odgovaraju gama globulinima odstupaju od normalnosti, imunofiksacija identificira koji je od ovih proteina izmijenjen, u smislu količine i kvalitete.
Ukratko, serumska imunofiksacija može se propisati:
- U slučaju kada drugi laboratorijski testovi daju abnormalni rezultat, u smislu odsutnosti ili manje i veće količine proteina plazme u odnosu na normu;
- Kada se sumnja na prisutnost bolesti karakteriziranih proizvodnjom monoklonske komponente, kao što su:
- Višestruki mijelom i njegove varijante;
- Waldenströmova makroglobulinemija;
- amiloidoza;
- Kada pacijent razvije simptome i znakove koji ukazuju na prisutnost monoklonske gamopatije ili multiplog mijeloma, kao što su:
- Bolovi u kostima;
- anemija;
- Jednostavan umor;
- Povremene infekcije;
- Neobjašnjivi prijelomi.
U slučaju multiplog mijeloma, elektroforeza proteina i imunofiksacija su značajni za praćenje napretka bolesti (praćenje).
Imunofiksacija: na koje se uzorke može izvesti?
Biološki uzorci koji se mogu podvrgnuti imunofiksaciji su uglavnom:
- Serum (imunofiksacija seruma);
- Mokraća (imunofiksacija mokraće);
- Tekućina * (imunofiksacija tekućine).
* Napomena : CSF ili cerebrospinalna tekućina je tekućina koja prožima i štiti mozak, kičmenu moždinu, kranijalne živce i kralježnicu.
Normalne vrijednosti
NEGATIVNI rezultat imunofiksacije seruma i urina za monoklonalne ili poliklonalne gama globuline smatra se NORMALNOM .
Gama globulini
Gama globulini čine 9-20% ukupnih proteina plazme.
- Referentna vrijednost Gamma globulin : 0, 9-1, 4 g / dl
Što se tiče ukupne koncentracije imunoglobulina ( IgG + IgM + IgA ), vjeruje se da su vrijednosti između 600 i 2300 mg / dl normalne.
- Referentna vrijednost Imunogobulini u serumu :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Napomena : referentni interval ispitivanja može se neznatno razlikovati ovisno o dobi, spolu i instrumentaciji koja se koristi u laboratoriju za analizu. Zbog toga je poželjno konzultirati raspone navedene izravno u izvješću. Također treba imati na umu da rezultate analize treba u cjelini ocijeniti liječnik opće prakse, koji poznaje povijest bolesti pacijenta.
Visoke vrijednosti - Uzroci
Povećanje gama globulina može biti:
- Poliklonsko, ako je proizvodnja imunoglobulina heterogena, tj. Sve komponente gama-globulina - proizvedene ili izvedene iz različitih plazma stanica - su pod utjecajem povećanja;
- Monoklonsko, kada se gama globulini proizvode ili izvode iz jednog tipa (klon) plazma stanica.
Povećanje poliklonalnih gama globulina može se povezati s:
- Kronične upalne bolesti;
- Reumatoidni artritis;
- Sistemski eritematozni lupus;
- Kronične bolesti jetre (kao što su hepatitis i ciroza);
- Akutne i kronične infekcije;
- Nedavna imunizacija;
- Neke bolesti tumora.
Visoke vrijednosti monoklonskih gama globulina mogu ukazivati na prisutnost:
- Neke novotvorine i kronične upale;
- Multipli mijelom;
- limfom;
- Waldenströmova makroglobulinemija.
Višak gama globulina naziva se hipergamaglobulinemija, dok je manjak poznat kao hipogamaglobulinemija .
Niske vrijednosti - Uzroci
Smanjenje gama-globulina može ukazivati na prisutnost različitih bolesti imunološkog sustava na genetskoj osnovi, uključujući agamaglobulinemiju, ili sekundarnu imunodeficijenciju (npr. AIDS, zatajenje bubrega, akutnu sepsu i Cushingov sindrom).
Smanjenje vrijednosti gama globulina također može ovisiti o upotrebi citostatičkih lijekova, imunosupresiva i steroida.
Kako se izvodi
Imunofiksacija seruma
Imunofiksacija seruma uključuje jednostavnu izvlačenje krvi iz vene ruke. Serum se dobiva centrifugiranjem biološkog uzorka; to zapravo omogućava da se frakcija koja sadrži stanice (korpuskularni dio) odijeli od tekuće krvi (plazme). U krvnom serumu nema faktora zgrušavanja (fibrinogen, faktor VIII, faktor V i protrombin).
Imunofiksacija mokraće
Za izvođenje urinarne imunofiksacije potrebno je sakupiti malu količinu urina u posebnu sterilnu posudu. Na temelju indikacija liječnika i laboratorija, uzorak se može prikupiti bez preciznog vremena ( nasumično ) ili unutar 24 sata .
Imunofiksacija tekućine
Analiza zahtijeva uzimanje male količine cerebrospinalne tekućine, kroz umetanje igle, u spinalnu šupljinu ( lumbalna punkcija ).
priprema
Imunofiksacija: kako se pripremate za ispit?
- Prije uzimanja uzoraka krvi, neki laboratoriji mogu zahtijevati od vas da promatrate post od najmanje 10-12 sati. Tijekom tog vremena dopuštena je mala količina vode.
- Imunofiksiranje se može provesti na urinu prikupljenu u određeno doba dana (slučajno) ili tijekom 24 sata, tako da je prije toga potrebno nabaviti odgovarajuće sterilne spremnike.
- Što se tiče imunofiksacije tekućine, umjesto toga nije potrebna posebna priprema.
Što može promijeniti ishod ispita?
Neki lijekovi mogu utjecati na ishod imunofiksacije, pa je preporučljivo izvijestiti liječnika o svim terapijama koje su u tijeku.
U šest mjeseci prije pregleda, primjena cjepiva (imunizacija) i uporaba lijekova kao što su fenitoin, prokainamid, oralni kontraceptivi, metadon i terapeutski gama globulin mogu povećati koncentraciju imunoglobulina. Drugi lijekovi koji mogu promijeniti rezultat testa su kortikosteroidi, neomicin, acetilsalicilna kiselina i klorpromazin.
Tumačenje rezultata
Rezultat imunofiksacije se procjenjuje u kombinaciji s rezultatima drugih analiza. Tumačenje nalaza je odgovornost liječnika opće prakse ili referenta koji može prepoznati i usporediti promjene koje utječu na određeni gama globulin (na primjer, traka koja se podudara s imunoglobulinima G) na određene bolesti. Ova procjena potvrđuje ili podržava dijagnostičku hipotezu: općenito, imunofiksacija može otkriti normalan profil gama globulina ili identificirati monoklonalni protein ili poliklonalni model .
Kada se bolest definira, imunofiksacija se može izvesti za:
- Praćenje bolesti tijekom vremena, zatim slijedite njegov tijek (praćenje);
- Provjerite učinkovitost terapijskog protokola .
Za i protiv imunofiksacije
U usporedbi s elektroforezom proteina, imunofiksacija:
- To je brže : rezultati imunizacije obično se dobiju unutar tri sata;
- Osjetljivija je (iako neznatno): imunofiksacija može otkriti imunoglobulin koji je isključen iz elektroforeze proteina, osobito pri niskim koncentracijama (manje od 1 g / l).
Nadalje, imunofiksacija:
- Može se djelomično automatizirati ;
- Lako je čitljiva i interpretabilna .
Međutim, imunofiksacija je skuplja od elektroforeze proteina i dopušta samo analizu gama globulina .
Normalan rezultat
U imunofiksaciji, normalan put uključuje:
- Traka koja se podudara s tamnijim imunoglobulinom G ( IgG );
- Traka koja odgovara najslabijem imunoglobulinu A ( IgA );
- Izostanak trake za imunoglobulin M ( IgM );
- Kapa traka je gušća od lambda (laki lanac), s omjerom 2: 1.
U normalnom rezultatu, trake su velike i postoji postupno i ujednačeno smanjenje gustoće boje prema rubovima trake imunoelektroforeze.
Poliklonalni gama globulini
U nekim slučajevima, sve imunofiksacijske trake su jednako zamagljene u istoj mjeri. Ovaj model predstavlja prisutnost poliklonalnih imunoglobulina . Također, u ovom slučaju, trake su široke, a prijelaz na rubove imunoelektroforetske trake je postupan. IgM traka - normalno odsutna - je široka.
Monoklonalni gama globini
Kada se na putu imunofiksacije može identificirati uski pojas s oštrim rubovima, to znači da je traženje monoklonskih komponenti pozitivno .
Identifikacija monoklonskog imunoglobulina korisna je u dijagnostici sljedećih stanja:
- Monoklonalna gamopatija neutvrđene važnosti (MGUS);
- Multipli mijelom;
- Waldenstromova makroglobulinemija;
- Amiloidoza.
Nadalje, imunofiksacija se može koristiti za praćenje terapije disskrasija plazma stanica (tj. Multipli mijelom i Waldenstromova makroglobulinemija). Ako se razina monoklonskog proteina smanjuje ili se ne može otkriti nakon kemoterapije, može ukazivati na odgovor na liječenje . Nasuprot tome, monoklonski protein koji ostaje unatoč liječenju znak je refraktorne bolesti .
Imajte na umu . Negativan rezultat imunofiksacije ne isključuje uvijek disskrasiju plazma stanica. Na primjer, ne sekretorni multipli mijelom ili oligosekretori mogu dati negativne rezultate i u urinu i u serumu. Stoga, ako je dijagnostička sumnja na gamopatiju još uvijek visoka, naznačeno je određivanje omjera Kappa / Lambda Libere lakih lanaca ( K / L omjer ).
Imunofiksacija i dijagnoza multiple skleroze
Imunofiksiranje cerebrospinalne tekućine (likera) propisuje se kada liječnik posumnja na prisutnost multiple skleroze . U ovom slučaju, put koji je određen je karakterističan, jer naglašava prisutnost takozvanih oligoklonalnih traka . Rezultat se u izvješću laboratorija navodi kao pozitivan . Treba uzeti u obzir da se trake normalno ne promatraju u serumskoj imunofiksaciji, jer su povezane s proizvodnjom intratekalnih gama globulina .
Međutim, treba napomenuti da ovaj nalaz ne potvrđuje nužno dijagnozu, budući da se druga stanja mogu pojaviti s oligoklonalnim trakama u cerebrospinalnoj tekućini.
Drugim riječima, identifikacija oligoklonskih traka s imunofiksacijom likvora je vrlo korisna za potporu dijagnozi multiple skleroze, ali mora biti potvrđena drugim istraživanjima . Drugi uvjeti koji mogu dati ovaj rezultat su upale središnjeg živčanog sustava, uključujući: encefalitis HIV-a, neurosifilis, neurosarkoidozu, Lyme-meningoencefalitis, maligne bolesti središnjeg živčanog sustava, optički neuromijelitis i transverzalni mijelitis.
