Esej ABTS
To je analitička metoda koja koristi spektrofotometrijska mjerenja za određivanje antioksidacijskog kapaciteta uzorka. Upotrebom UV-Vis spektrofotometra izmjerena je apsorpcija otopine koja sadrži radikal ABTS • +, generirana oksidacijom ABST-a (2, 2'-azinobis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonat), bezbojne tvari u obliku Radikali su obojeni apsorpcijom na karakteristikama valnih duljina u vidljivom području Dodatak otopini ABTS + + antioksidativnih molekula, koje mogu djelovati prijenosom vodika i elektrona, određuje redukciju radikala u bezbojni oblik, Ovo izbjeljivanje, proporcionalno količini prisutnog antioksidanta, može se mjeriti kao smanjenje apsorpcije tijekom određenog vremena na određenoj valnoj duljini (734 nm). Antioksidacijska snaga se izražava usporedbom s vrijednosti apsorbancije izmjerene za poznate količine molekule antioksidansa odabrane kao referentni standard, koje je obično askorbinska kiselina ili Trolox (u ovom slučaju govorimo o antioksidativnoj aktivnosti TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity.
Mjerenje antioksidacijske snage temeljeno na uporabi ABTS ima prednost što je jednostavno i brzo. Štoviše, on omogućuje mjerenje antioksidativnih tvari i hidrofilnih i lipofilnih u širokom rasponu pH. Međutim, treba imati na umu da korišteni radikal (ABTS • +) nije fiziološki i nije prisutan u biološkim sustavima i da se često ističu problemi ponovljivosti mjerenja zbog kinetike reakcija različitih uključenih antioksidanata.
FRAP (antioksidacijska moć smanjenja željeza)
FRAP test mjeri sposobnost redukcije antioksidanata na ione željeza. To je metoda koja se temelji na prijenosu elektrona, u kojoj ioni željeza prolaze od Fe3 + do Fe2 +. Pod određenim uvjetima pH (3.6) i u prisutnosti TPTZ (2, 4, 6-tris (2-piridil) -s-triazina), ti ioni tvore komplekse s različitim karakteristikama, posebno reduciranim derivatom (Fe2 +) -TPTZ) pretpostavlja plavu boju koja ima maksimalnu apsorpciju na 593 nm koja se može mjeriti spektrofotometrijski. Sposobnost redukcije antioksidativne tvari može se stoga izmjeriti kao promjena apsorbancije otopine koja sadrži oksidans na valnoj duljini utvrđenoj usporedbom s varijacijom u odnosu na standard (npr. Askorbinska kiselina).
Test FRAP dizajniran je za mjerenje snage smanjenja plazme, ali je zatim prilagođen za ispitivanje antioksidacijske sposobnosti čistih spojeva i kompleksnih matrica. U stvari, budući da ova metoda omogućuje procjenu samo redukcijskog kapaciteta prijenosom elektrona, potpuno ignorirajući djelovanje antioksidanata koji djeluju putem prijenosa vodika, to ne dopušta mjerenje doprinosa molekula, kao što su tioli i proteini, koji igraju ulogu antioksidansa. u biološkim tekućinama (npr. u krvi). Prednost ove metode je u tome što je ona jedna od najjednostavnijih, najbržih i najjeftinijih metoda za određivanje antioksidacijskog kapaciteta in vitro.
Ispitivanje DPPH
2, 2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH •) je vrlo stabilan i komercijalno dostupan dušikov radikal, karakteriziran intenzivnom ljubičasto-crvenom bojom, koja se smanjuje kada je smanjena u prisutnosti molekule s antioksidacijskim kapacitetom. Spektrofotometrijskim mjerenjem na 517 nm promjene apsorpcije otopine DPPH nakon reakcije s antioksidacijskim spojem moguće je kvantificirati redukcijsku sposobnost ispitivane tvari bilo da djeluje s prijenosom vodika ili prijenosom elektrona. Rezultat je općenito izražen kao IC50, tj. Količina antioksidansa koji može smanjiti početnu koncentraciju DPPH za 50%.
To je brza, jednostavna i jeftina metoda. Granice ove analitičke tehnike daju se mogućnošću da su rezultati analize iskrivljeni u slučaju kada se molekule koje se ispituju apsorbiraju u istom rasponu valne duljine DPPH radikala ili u prisustvu velikih molekula koje su statički sterilizirane i koje ne oni reagiraju s reaktivnim dijelom radikala. To uzrokuje da DPPH reagira s antioksidansima do 1000 puta sporije od peroksilnih radikala.
PCL TEST (fotokemiluminiscencija)
PCL test temelji se na reakciji specifičnih vrsta radikala, superoksidnog aniona (O2 - -), koji je fotokemijski generiran UV zračenjem, sa spojem koji može emitirati kemiluminescenciju. Korišteni marker je luminol, molekula koja kad se oksidira slobodnim radikalima emitira svjetlo koje se može mjeriti posebnim instrumentom (Photochem®). Prisutnost antioksidativnih tvari u mješavini obroka deaktivira radikalne vrste koje inhibiraju emisiju kemiluminescencije. PCL analiza je vrlo brza i osjetljiva. Nadalje, uz primjenu dva različita analitička protokola, nazvana ACW (Antioksidativni kapacitet topiv u vodi) i ACL (topivi u antioksidacijskom kapacitetu lipida), doprinos ukupnom antioksidacijskom kapacitetu vodotopive komponente (flavonoidi, vitamin E) može se izmjeriti za isti spoj. C, aminokiseline itd.) Nego liposolubilne (tokoferoli, tokotrienoli, karotenoidi, itd.). Antioksidacijski kapacitet ispitivanog proizvoda dobiva se usporedbom vrijednosti zabilježenih s mjerenjima koja se odnose na standardne referentne molekule, askorbinsku kiselinu za ACL protokol i Trolox za ACW protokol.
